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miScript miRNA PCR Array Service

用于信号通路或疾病相关的miRNAs或整个miRNomes的miRNA谱分析

  • 灵敏、特异性的miRNA谱分析
  • 用于信号通路或疾病相关的miRNAs或全miRNome的谱分析
  • 卓越的数据品质
  • 严格的质量控制

miScript miRNA PCR Array Service使用miScript PCR System对您的目的miRNAs进行表达谱分析。miScript miRNA PCR Arrays用于对信号通路相关的、疾病相关的或全miRNome进行表达谱分析。

Cat No./ID: miScriptService
miScript miRNA PCR Array Service
miRNA profiling service for pathway- or disease-specific miRNAs or whole miRNomes

miScript miRNA PCR Array Service适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Principle

miScript miRNA PCR Array Service使用SYBR® Green-based real-time PCR技术通过您的样本确定miRNA表达谱的灵敏度和特异性。这项服务包括分离总RNA(包括miRNA)、RNA逆转录成cDNA、miRNAs的real-time PCR检测以及数据分析的全部步骤。  

miScript miRNA PCR Arrays应用前沿技术,将通用尾和逆转录与miRNA-specific PCR整合。表达谱分析高度灵敏,10 拷贝的miRNA也可检测到。引物的特异性好,能够有效区分非常相近的相关异构体,即使miRNAs只有一个碱基的差异。经验证的流程和优化的处理方法使得获得的数据品质好、周转时间短。

Procedure

miScript miRNA PCR Array Service包括:

总RNA(包括miRNA)纯化
从细胞、组织、血液、福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本、激光捕获纤维切割(LCM)样本、针穿刺抽吸活检(FNAB)样本和其他需要的小样本
使用miScript II RT Kit进行逆转录
使用信号通路或疾病相关以及全miRNome miScript miRNA PCR Array进行miRNA谱分析
数据分析 
样本处理

如需样本递送和运输相关说明,请联系QIAGEN技术支持。我们接受细胞、组织或总DNA样本,其中细胞和组织,还提供DNA分离服务。

运输前:

咨询QIAGEN技术支持,获取样本递送表格。
填写表格,与样本一起运输。
说明原料数量及储存条件。
签上姓名及日期。
按照说明书运输相关样本类型。
提交细胞或组织样本

所有样本收集应该在不含DNase的环境中及时进行。请注意起始原料所需的最小量。递送样本前,如果没有达到最小量或已分离的样本储存方法与我们推荐的不同,请联系QIAGEN技术支持。

细胞:

每个样本至少提供10万个细胞。
在递送表格中注明详细细胞数量。
液氮中冷冻细胞。
也可提供细胞裂解匀浆(请参照miRNeasy Mini Handbook获得使用QIAzol Lysis Reagent裂解细胞的详细信息)
样本在–80°C下冷冻储存,在干冰条件下运输。

组织:

尽可能每个至少提供50 mg组织。
请在递送表格中注明详细组织重量。
收集样本后,样本在RNAlater RNA Stabilization Reagent或AllProtect Tissue Reagent中过夜稳定。
过夜孵育后,冷冻前去除多余的试剂。
液氮中冷冻组织。
样本在–80°C下冷冻储存,在干冰条件下运输。

FFPE样本:

请在分离和提交样本前,最好在收集样本前,咨询QIAGEN技术支持。
对于做成片子的组织切片,至少要提供4张片子,且切片的厚度至少5到10微米。对于某些来源的组织可能要提供更多的片子。
对于新鲜的FFPE切片,提供3到4个厚度为20微米的切片即可。
请详细说明固定过程及样本的年龄。
室温下存储和运输样本。

LCM样本:

请在分离和提交样本前,咨询QIAGEN技术支持。
样本在–80°C下冷冻储存,在干冰条件下运输。

FNAB和其他小样本:
请在分离和提交样本前,咨询QIAGEN技术支持。

其他类型样本:

请在分离和提交样本前,咨询QIAGEN技术支持。

提交纯化的RNA

RNA样本对RNase非常敏感。请带上手套且在无RNase的环境中纯化RNA。

推荐的RNA纯化方法
样本类型方法
细胞 miRNeasy Kit或RNeasy Plus Kit(QIAGEN Supplementary Protocol;使用RNeasy Plus Mini Kit和RNeasy MinElute Cleanup Kit从动物细胞中纯化miRNA)RNeasy Plus Micro Kit
组织 miRNeasy Kit
FNAB miRNeasy Kit
FFPE样本 miRNeasy FFPE Kit
LCM样本 FFPE切片样本使用miRNeasy FFPE Kit;冰冻切片样本额使用miRNeasy Kit
少于100 ng总RNA的小样本 miRNeasy Kit
全血 制备RNA前,必须使用选择性裂解(详细参见QIAamp RNA Blood Mini Handbook)或密度梯度离心(如Lymphoprep, Greiner Bio-One [cat. no. 1031966])将红细胞从全血样本中去除。然后,使用miRNeasy Mini Kit从白细胞碎片中纯化RNA。也可使用PAXgene Blood RNA Kit纯化RNA。
酚法分离的总RNA 使用miRNeasy Kit纯化RNA
其他样本类型 请联系QIAGEN技术支持

为了从PCR Array获得较好的结果,所有的RNA样本应溶解在RNA Isolation试剂盒提供的RNase-free水中。不要使用DEPC-treated 水。

注意:总RNA样本非常适合miScript miRNA PCR Array Service。无需提供富含小RNA的样本。

质量控制

推荐使用紫外分光光度法确定纯化的RNA的质量。请提交给miScript miRNA PCR Array Service相关的结果。

通过确定核糖体RNA带的完整性来评估RNA的品质,取每个RNA样本的一小部分在变性胶或QIAxcel上电泳即可。

注意:由于从福尔马林固定和石蜡包埋的组织中分离的RNA通常会降解,且样本降解的程度不同。因此,从FFPE组织中分离RNA的方法由我们所描述的方法决定,它可能只适用于需要比较的样本。

注意:从某些来源,如血清或血浆样本、LCM样本和FNAB样本获得的RNA的量,如使用这些方法不足以进行质量控制。
数据传输

使用QIAGEN数据分析软件分析数据。电子表格数据可从安全的FTP网站上下载或通过电子邮件发送。完整的数据和实验报告包括:

原始CT
ΔΔCT分析
Excel电子表格(成对比较数据分析,包括原始数据、表格结果以及散点图、3D和火山图)
Applications

miScript miRNA PCR Array Service用于:

疾病或信号通路相关miRNA谱分析
全miRNome谱分析

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