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RNeasy FFPE Kit

从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA

  • 创新的方法用于克服福尔马林造成的交联
  • 有效的释放RNA而不破坏其完整性
  • 高效的实验方案,在85分钟内即可获得纯化的RNA

RNeasy FFPE Kit专为从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA而设计。独特的裂解和孵育条件逆转福尔马林对RNA的修饰。并且裂解缓冲液可将RNA从组织切片中有效释放出来,防止RNA的进一步降解。试剂盒同样使用DNase和DNase Booster Buffer优化,去除基因组DNA的污染。使用RNeasy MinElute离心柱纯化获得的总RNA,洗脱体积可小至10 μl。整个纯化流程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。

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Cat No./ID: 73504
RNeasy FFPE Kit (50)
50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes, Proteinase K, RNase-Free DNase I, DNase Booster Buffer, RNase-Free Buffers, RNase-Free Water

RNeasy FFPE Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。


Product Details

Performance
使用RNeasy FFPE Kit从固定和包埋的样本中纯化获得的RNA的产量比用其他方法更高(参见"Greater yields of RNA")。回收得到的完整RNA最小可达70 nt,并且几乎没有基因组DNA的污染(参见"Recovery of all usable RNA")。用该试剂盒从FFPE样本中纯化得到的RNA片段非常适用于real-time RT-PCR等敏感的下游应用(参见"Reliable results in real-time RT-PCR analysis"和"Successful real-time RT-PCR analysis")。
Principle

用福尔马林固定组织会导致RNA-RNA和RNA-蛋白质的交联,这会影响RNA在酶学分析中的性能。FFPE样本固定和包埋同样会导致核酸的严重片段化。RNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件来逆转福尔马林对RNA的修饰。裂解缓冲液能使RNA从FFPE组织样本中有效释放,并防止进一步的RNA降解。经优化的条件能纯化得到所有可用的RNA,使用RNeasy FFPE Kit从FFPE样本中得到的RNA的产量比其他方法更高。

Procedure

整个RNeasy FFPE操作流程可在85分钟内完成(参见"RNeasy FFPE procedure")。使用蛋白酶K裂解样本仅需15分钟。裂解后,样本在80ºC下孵育15分钟。之后,用DNase处理能有效去除样本中的基因组DNA,包括小的DNA片段。最后,使用RNeasy MinElute离心柱即可收集纯化的RNA,洗脱体积14–30 µl。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。

Applications

RNeasy FFPE Kit可纯化FFPE 样本中所有大于70 nt RNA,得到适用于RT-PCR等众多下游应用的RNA片段。但是,从FFPE样本中纯化得到的RNA会严重片段化,不能用于需要完整RNA的下游应用。如果使用片段化RNA可能需要做些修饰(例如在RT-PCR时设计小的扩增子)。进行cDNA合成时,不能使用oligo-dT引物,而要使用随机或基因特异性引物。

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参考文献
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