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RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit

在BioRobot Universal System上使用96孔板纯化细胞中的总RNA

  • 高通量纯化RNA
  • 样本处理快速方便
  • 从10–500,000个细胞中纯化获得RNA,产量重复性好
  • 得到的高品质RNA适合各种下游应用
  • 无有机提取或沉淀

RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit使用硅胶膜RNeasy 96孔板对多达96个培养细胞样本进行高通量总RNA纯化。在BioRobot Universal System上进行自动纯化,每批可纯化多达96或192个样本,并可进行后续的real-time RT-PCR反应体系构建。可使用QIAGEN 96-Well-Plate Centrifugation System和/或QIAvac 96真空装置进行手动纯化。

Cat No./ID: 967152
RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit (12)
For 12 x 96 total RNA preps on the BioRobot 8000 or BioRobot Universal System: 12 RNeasy 96 Plates, Elution Microtubes CL, Caps, S-Blocks, RNase-Free Reagents and Buffers
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高品质RNA可用于对低拷贝转录本的灵敏分析。
使用RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit从1至1 x 105个HeLa S3细胞中分离RNA。使用100 µl不含RNA酶的水洗脱总RNA,取5 µl用于RT-PCR。在ABI Sequence Detection System上使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit及低拷贝c-fos转录本特异性的引物和探针,进行定量一步法real-time RT-PCR分析。[A] 扩增曲线。[B] CT值。误差条代表不同细胞数目的各8个样本的标准差。
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高品质RNA的产量具有可重复性。
[A] 琼脂糖凝胶电泳分析。将取自同质细胞培养物的HeLa细胞(5 x 105)沉淀于96孔培养板的各个孔内,使用RNeasy 96 Kit分离总RNA。采用甲醛琼脂糖凝胶分析各一半的洗脱物。[B] 相应的northern印迹,采用32P标记的GAPDH探针杂交。[C] RNA产量分析。每个方块代表96孔培养板中的一个孔的制备产量。
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对甚至是100个细胞的RNA进行RT-PCR。
使用RNeasy 96 Kit从图示量的HeLa细胞中分离的细胞质RNA的RT-PCR。使用oligo-dT引物对10 µl(1/10)的洗脱液进行逆转录,取5 µl(1/5)的cDNA混合物用于100 µl的PCR,扩增214 bp的β-actin片段。C-:无模板;C+:β-actin体外转录本;M:100 bp DNA分子量标准。
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自动RNA纯化,具有可重复性。
使用RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit,从96份(各5 x 104个细胞)HeLa S3细胞培养物中分离RNA。在BioRobot 8000工作站上使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit及低拷贝c-myc转录本特异性的引物和双标记探针,采用相同的实验方案构建定量一步法real-time RT-PCR。所有96个样本的阈值循环(CT)如图所示。平均CT值为21.34 ±0.34(平均值±标准差),代表CV为1.6%。
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RNeasy 96孔板。
RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit中提供RNeasy96孔板。
Performance
RNeasy 96体系可快速、可重复的纯化总RNA,用于高通量基因表达分析。纯化得到的RNA适用于real-time RT-PCR和微芯片分析等高通量基因表达分析(参见"High-quality RNA for sensitive analysis of a low-copy transcript")。样本量10–5 x 105个细胞(参见"RT-PCR of RNA from as few as 100 cells"),可从大样本量的样本中纯化得到高品质RNA(参见"Reproducible yields of high-quality RNA")。在整个纯化过程中,个体差异小;使用QuantiTect Probe RT-PCR Kit,在纯化结束时可轻松的达到TaqMan循环阈值而差异系数低于3%(参见"Repeatability of fully automated RNA purification")。
Principle

RNeasy 96体系可标准化、高通量的从样本中可靠的纯化高品质RNA(见表)。简洁的流程是RNeasy 96技术纯化快速和高效的关键。可在96孔板上培养细胞并直接裂解细胞。将裂解物转移至RNeasy 96孔板中后(参见"RNeasy 96-well plate"),孔中的RNA与硅胶膜结合,污染物被洗去。然后使用RNase-free的水将纯化的RNA洗脱到单独的收集管中,以备长期储存,也可即用于任何实验。RNeasy技术适用于>200 nt的RNA,因此RNA产物不包括5S rRNA、tRNAs或其他小分子量RNAs。

RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit的规格
规格 详细信息
规格 RNeasy 96孔板配套1.2 ml Collection Microtubes
样本来源 动物或人类细胞
样本量 10–5 x 105个细胞
结合能力 每孔多达100 µg RNA
1 x 105个细胞的产量* HeLa细胞:1.6 µg
LMH细胞:1.3 µg
COS-7细胞:3.1 µg
Huh7细胞:2.0 µg
Jurkat细胞:1.4 µg
洗脱体积 45–140 µl
* 不同的发育阶段和生长条件等可能导致不同的产量。
Procedure

使用RNeasy 96 BioRobot 9604 Kit可在BioRobot 9604或BioRobot 3000工作站上自动纯化总RNA。BioRobot工作站每批可从多达192个样本中纯化RNA。该仪器通过一个孔板的实验方案,可在一次运行中进行RNA纯化和反应体系构建,从在96孔板中培养细胞到制备RT-PCR混合液,产物可即用于real-time基因表达分析。过滤嘴可防止交叉污染,精确的仪器自动操作可将孔间差异最小化,确保高度可重复性。还可使用RNeasy 96 Kit在QIAvac 96真空装置和/或96-Well-Plate Centrifuge System上手动纯化RNA。

Applications

RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit可纯化获得高品质RNA,适用于:

基因表达分析中的高通量RNA应用
real-time RT-PCR等灵敏的应用
药理与毒理学研究
Features
Specifications
应用 PCR, real-time PCR, microarray
洗脱体积 45–140 µl
自动化处理 BioRobot 8000 Workstation or BioRobot Universal System
规格 96-well plate
主要样本类型 Cultured cells
处理 Automated
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 RNA
样本量 5 x 10e5
技术 Silica technology
产量 1.3–3.1 µg
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